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3种白腐菌木质素降解酶的比较_图文

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第2 7卷

第 3期 

中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 
J u n l fCe ta  o t   ie st  fFo e ty& Teh oo y o r a o  n rlS u h Unv r i o  r sr   y c n lg  

V o .2   N o   1 7 .3

2 0 年 6月  07

Jn 07 u .2 0  

文 章 编 号 :1 7 ~ 9 3 2 0 ) 3 1 1 0   6 3 2 X( 0 7 0 —0 3 ~ 5

3种 白腐菌木质 素降解酶的比较 
董旭 杰 , 曹福 祥 , 陈 静, 吕 聪 
( 南 林业 科 技 大 学 , 南 长 沙 4 0 0 ) 中 湖 1 0 4 

摘  要 : 对 3 白腐 菌—— 黄孢 原毛平革菌 、   种 变色栓 菌和 木质层孔菌在恒温振 荡培养 条件下 产漆酶、 锰过氧化物酶的情况进行 比  
较 研 究 , 时 还 对此 3种 菌 在 培养 过 程 中还 原 糖 的变 化 作 了研 究 . 果 表 明 : 白腐 菌 中变 色 栓 菌 产 漆 酶 相 对 最 高 , 漆 酶酶 活 最 高  同 结 3种 其 达 到 1 6 5U/ 产 酶 最 高 时 间 为 第 8天 ; 3 .  L, 丽木 质 层孔 菌 产锰 过 氧 化 物 酶 相 对 最 高 , 最 高 酶 活 达 到 80 2U/ 产 酶 最 高 时 间 为 第 8 其 8 .  L,   天 ; 时在 培 养 过 程 中还 原 糖 含 量 随 培 养 时 间的 延 长 而 逐 渐 降 低 . 同  

关 键 词 : 酶工程 }   木质素降解酶 ; 酶学性质 ; 白腐菌 

中 图 分 类 号 : 0 3 , } 5  662Q 5

文 献 标 志 码 : A   

Co p r s n o   g n De r da i n Enz m e   o uc d By m a i o   f Li ni   g a t o   y s Pr d e    
Th e   hie r tFu i r eW t - o   ng  

DONG Xu j ,CAO  — in   —i e Fu xa g,CHEN  ig,Ln C n   Jn  o g
( nta  o t   ie st  fF r sr  n   c n lg Ce r lS u h Un v r i o  o e ty a d Te h o o y,Ch n h   1 0 4,Hu a y a gs a 4 0 0 n n,Chn   ia)

A b t ac : c mp r tv   t d   s ma e oft e pr d c i n o   c a e a d M a g ne e p r xi a e   n v b a i g c li a i n b   hr e s r t A  o a a i e s u y wa   d     h   o u to   f La c s   n   ‘ n a s   e o d s s i   i r t   u tv t   y t e   n o wh t — o   u gi ie r t f n :Ph n r c a t  h y o p r u ,Tr mee   e sc l ra d Fa s i o u ,a d o   h   o c n r to   h n e o  he r d c d a e o h ee c r s s o i m a t sv r io o   n   me   gn s s n   ft e c n e t a i n c a g   ft  e u e   l
g u o e i   if r n   u tv to l c s  n d f e e tc li a i n.Th   e ulss o t a   h  a c s   r d c d b   a t sv r io o  s t e h g e ta e r s t  h w  h tt e l c a e p o u e   y Tr mee   e s l r i  h   i h s   mo g t  hr e,t e c n  het e h  ma g n s e p r x d s s p od c d b   me  i o u  s t   i h s  m o g t e t r e,a d t   l c s   o c nta i n wi  e l we e   n a e a   e o i a e   r u e   y Fa s l gn s s i  he h g e t a n h he n   he g u o e c n e r to   l b   o r d l

wi   utv to   a . t c liain d ys  h Ke   y wor s:n y  ngn eig;l i  g a ai n;c a a trsiso  n y oo y;wht ~o u g  d e z mee ie rn i nde r d to gn h rc eit   fe z m l g c ie r tf n i

木质 素是 地球 上仅 次 于纤 维 素 的最 为丰 富 的有机 再 生 资源 , 是一 类 以苯丙 烷 为 基本 结构 单元 构 成 的复  它 杂 的芳 香族 高 分子 化合 物 . 随着 人 类 可利用 资 源 的越 来越 紧 缺 , 木质 素 的微 生物 降解 成 了当今 研究 的热 点 . 据  报 道, 自腐 菌 wht rt u g s WR i  o f n u , F是 木 质 素 降 解 能 力 很 强 的 真 菌. e   国外 对 黄 孢 原 毛 平 革 菌 P a eoh e   h nrc at e

c rssoim 的木 质素 降解 已作 过一 定 的研究 L , hy op r u 1 已从 该 菌 中首次 分离 纯化得 到 2种 降解 木质 素 的酶系 ——   
木 质 素过 氧化 物 酶L g i  eo ia e ( innp r xd s s 简称 L p , 过 氧化 物 酶 Ma g n s  eo ia e ( 称 Mn ) 国内李 慧  i) 锰 n a eep rxd ss 简 P; 蓉 等0对 该 菌研究 也 较多 . 色栓 菌Tr me s es oo   变 a t   ri l e v c r的木质 素 降解 已有报 道  ]从 中提 出漆酶 L cae 简  , acs ( 称 L c 含量相对 较 高. a) 但至今 国内外 尚未 见到 木质 层孔 菌 Fo sl n ss 质素 降解 方 面的相 关 报道 , 没有  me  g ou 木 i 也 这 3种真 菌木 质素 降解 的 比较研 究. 文 中 旨在研 究 相 同条件 下 这 3种 白腐 菌木 质素 的降解 能力 , 时为进 一  本 同 步优 化产 酶条 件 的研究 打下 基础 .  

收 稿 日期 :2 0— 20  0 61— 4

修 回 日期 :20 — 33 0 7 —1 0  

作者 简 介 :董旭杰 (9 0 )女 , 1 8 - , 辽宁葫芦岛人. 硕士研究生 , 主要从事蛋 白质与酶工程研究 

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l2 3 



















报 

第2 7卷 

1 材 料 和方 法 
11 菌 . 种 

黄孢原 毛平 革菌 P c rss oim 5 0 7 , 自中科 院微 生物 研究 所 ; 色栓 菌 T. es oo . 1 1 购 自 . hy op ru   . 7 6 购 变 vri l 5 0 6 ,   c r 中科 院微生 物研究 所 ; 木质层 孔 菌 F.in ss5 0 3 , 自中科 院微 生物 研究 所. 1 ou  . 1 2 购 g  
1 2 主 要 试 剂 及 仪 器  .

AB TS( ,  Az obs (一ty  e zbo oie6s l ncai )Sg 2 2 一 i — i 3eh l n tiz l   -uf i cd) ima公 司. Q— 2 0全温 振 荡 培养  n 一 b n o   HZ F 8

箱( 太仓华 美 生化 仪器 厂 )UV一 1 2P , 2 0   C紫外 可 见分光 光 度计 ( 尤尼 柯 仪器 有 限公 司) D L   0  H计 ( , E TA 3 2p 梅 
特勒 一托利 多仪器 有 限公 司) .  
1 3 培 养基  .

培 养基 A 高碳 低氮 ( L ( / =3 3 : HC N)C N 0 ) 葡萄糖 2  , 石酸铵 0 2g 磷 酸二 氢钾2g 硫酸镁 1 5g 维生  0g 酒 .  ,  , .  , 素 1  ̄2  , 量元 素 1 0mL  0 0mg 微 5  . 培 养基 B低 碳高 氮 ( C L HN) C N=3 0 ) 葡萄糖 2g 酒 石酸铵 2g 磷酸 二氢 钾 2g 硫酸 镁 1 5g 维 生素  (/ .3 :  ,  ,  , .  , B 0 0mg 微 量元 素 1 0mL  1  ̄2   , 1 5  . 培 养基C高碳 高氮 ( HN)C/ =3 . ) 葡 萄糖2   , 石酸铵 2g 磷酸 二氢 钾2 , 酸镁 1 5g 维 生素  HC ( N 03 : 0 酒 g  ,   硫 g .  , B 0 0mg 微 量元素 1 0mL  1  ̄2   , 1 5  . 微量元 素混 合 液 : S  .  Mn O4 9mmo/ C C 2 .   2 lL, a 10 9mmo/ Na 1 . 7mmo/   lL, C  1  0 lL,Z C 2 . 4   n 10 3 8mmo/    lI  ,
Fe O4 . 5   S   3 9mmo / Cu O4 .   0 lL, S 0 4 mmo / C C1 l L, o 2·6 O2 . 7   H2 0 7 5mmo / KAl S ) lL, ( O4 2·1 H2 0 0 1mmo /   2 O  . 2   lL,
HB  . 6mmo/ O3 1   0 lL,Na o M O4·2 O2 . 4   H2   0 1mmo L. 0 l/  

1 4 测 定 方 法  . 

漆 酶 的 测 定 参 照 Mu o 方 法  稍 作 修 改 : 应 体 系 含 有 50 nz 反    mmo / l L醋 酸 一醋 酸 钠 缓 冲 液 

( H值 4 5 2mL, .  p . )  0 5mmo/   T 0 1 lLAB S .  mL和 适 当的酶 液 , 5 于2 ℃测 定反 应液 在3mi   n内于4 0n 处 吸光 值  2  m
的增 加. 义 每 分钟 氧 化 1 ̄ l T 定 moAB S所 需 的酶 量 为 1 酶 活力 单 位 ( TS 4 0n 消光 系数 £ 。 3 0   个 AB   2   m   一 60 0
M 一 c 一 )   m   .

锰 过 氧化 物 酶 的 测定 参 照 李 慧 容 等 的方 法  。   稍作 修 改 : 反应 体 系 中含 有 5 mmo/ p 0 lL H值4 5 . 的乳 酸一  
乳酸 钠 缓 冲 液 2 mL, . mmo / 1 6 l L的 硫 酸 锰 溶 液 0 1 .  mL, . mmo / H O 0 1 1 6 l L     .  mL和 酶 液 适 量 . 温 下  室

2 0n 4  m处 测 反 应 于 4 n mi 内吸 光 度 的 增 加 . 义 每 分 钟 使 1 moMn 转 化 为 Mn 定  ̄ l   抖所 需 的 酶 量 为 1 酶 活 力  个 单 位.   还原糖 的测定 : 葡萄糖 溶 液作标 准 曲线 , 用 测定 酶  液 在 5 0 n 处 的 吸 光 值. 原 糖 标 准 曲 线 : 1  4  m 还 将 0 mg mL的标准 葡萄糖 溶 液 , H 值4 5的柠 檬 酸缓 冲  / 用p . ,  

液稀释成一组梯度葡萄糖标准液, 其浓度分别为 :. 、 翌 0 02    4 . 、 . 、. 、   ; 将  标 准 液 与  . 6
0  


0  0  1 0  6  8    mg mL /  

1  mL  

3mL NS 剂 混 合 , 水 煮 沸 约 5mi , 却 至 室  《 …    D 试 沸   n后 冷 温 , 蒸馏 水 定 容至 2  加 5mL, 以去 离 子水 为对 照 , 分 用
光 光度计 在 5 0n 处 测其吸 光值. 测 得葡 萄糖 溶 液  4 m 所 标 准 曲 线 如 图 1所 示 , 用 回归 方 程 Y一 0 1 52   利 . 9  x


0  . 2

0. 2  

04 . 

06 .  

08 . 

1  

0 1 32 得 到 还 原 糖 的 浓 度 . . 2  ,  

葡 萄 糖 浓度 /m ·   ) (gm  

图 1 还 原 糖 标 准 曲 线 

2 结 果 与 讨论 
2 1 不 同培养 条件 对 3 茵产 L c的影 响  . 种 a

F.  i1 g

Th   s a ar   c ve of gl o e c e t nd d ur     uc s   ontnt e  
de e m i t o   tr na i n

在不 同营养 的培 养条件 下 , 种 菌种 产漆 酶 的情 况见表 1和图 1 图 3 3 ~ .  

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第 3期 

董 旭 杰 等 : 种 自腐 菌 木 质 素 降 解 酶 的 比较  3
表 1 不 同 营 养条 件 对 3 菌 产 L c的 影 响  种 a
Tab e 1 The e f c soft e   l      f e t   hr eLaci   f e e   t ii  n dif r ntnu r tona  ond to   lc ii n

13 3 

0 
J  

己 
\  

瞧  键  键  燧 

蜒 

漕  潜 
艇 

时问/  d
+ H CLN + LCHN  十 H CHN 


时间/  d
◆一 HCI M — 卜 L ̄ f HN —★一HCHN 


时 问 /  d
4- H CL - N — ■一 L CHN 十   HCH N 

图 2  

不 同 营 养 条 件 下

P.  

图 3 不 同 营 养 条 件 下 T vri lr . es oo  c
产 漆 酶情 况 
Fi g.3 T.v r i o o   odu i  La     e sc l r pr cng c
u nde  di f e  nu r ton   r f er nt t i i al co i i   nd ton

图 4 不 同 营 养 条 件 下 F.i IS S 1 I U 产  gO 漆 酶 情 况 
Fi g.4   F.1 g s  pr du i  La   i no us o c ng c und r d f e e   t i i al e   i f r nt nu r ton   c di i   on ton

c r ss oi m 产 漆 酶 情 况  h y o ru p
Fi g.2   P.c y os rum pr hr s po i odu i   cng
La   c u nde   r di f r nt fe e  

nut i i nalc di i   rto   on ton

从 测 得 酶 活结 果 可 以看 出 , 碳 低 氮 培养 基  高

… 

3 白腐 菌的产漆酶量均很 高, 种 黄孢原毛平革菌 

1   4l 0

一  

低培而高oll 囊C菌薹0I] 大I对 萎 Il 最/降 |JJ 1低产为一   2养低 矗lL· .,酶 雾●- O碳. :匕■ 篓N漆  I   ,基 量  —L 高 这 6__  木 的 【}  这高 3 }三I 即比 萎 『__ 为的 相   r 1质 最 II— 漆氮 影 匕 l  也C 对 =UI 4 种 I1]  层 响 ||J U培 蓁  -● 1降 菌 一—. 酶孔产 I - 说/ 较 ■■_ 3低 _ L /N L 1 6养 量比 明基 L   . 5 , 随 了   而 U I n  
漆 酶 酶活 最 高 的 时问 均 在 培养 到第 8天 左 右 , 黄  孢 原毛 平 革 菌产 漆 酶 量最 低 , 变 色 栓 菌 和木 质  而
时 间 /  d 囝 黄 孢原 毛 平草 菌  ● 变 色栓 菌  口木 质 层 孔菌 

层孔 菌 相 比 , 变色 栓 菌 产 漆酶 量 略 高 于 木质 层 孔 
菌 ( 图 5. 见 )  
图 5 高 碳 低 氮培 养 条件 下 3 菌 种 产漆 酶 的 比较  个
Fi . 5 g   Th  c e om p i o  of ars n  La  u c nde   t  c ll a e r he u  v t  t c ond to   f H CLN  ii n o  

2 2 不 同培养 条件 对 3 菌产 Mn . 种 P的影 响 

实验结 果表 明 , 同营养 条 件下 , 3 试 验  不 对 个
菌种产锰 过 氧化 物酶 也有一 定 的影 响 ( 见表 2及 图 6 ) ~9 .  

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14 3 



















报 

第 2 卷  7

表 2 不同营养条件对 3 茵产 Mn 种 p的影 响 
Tab e 2 The e f c soft e   np wih dif r n   l     f e t   hr e M   t   f e e tnutii rtona  ond to   lc ii n

,  

0 

3 

蝗  苗  苗 

蜒  苗  苗  霉 
捌 

甥 

露  赭  霉 
舡i 【  

∞ 粥 鲫  O   如 ∞ ∞ O  O O   O ∞ O  O  O
捌 

堪 
时 间 /  d

耀 
时间 /   d

时问/  d




◆ 一 H CL N

— 一L ■ CNH

—★一 HCNH 

◆一HCL N

-卜 L . CHN

— ▲一 HCHN 



HCL + N

L CHN +

HCHN 

图 6 不 同 营 养 条 件 下 P. h y op ru   c r ss o im 产 Mn p酶 情 况 
Fi  6 g   P.c y o po im  pr hr s s ru odu i g cn  
M np   und r e  di f e   f er nt

图 7 不 同 营 养 条 件 下 T. es o r v r cl   i o 产 咖 p酶 情枷 枷 瑚 o Mn 咖 况             
Fi 7 T.v r io o   r ducng M np g   e sc l r p o i    
u nde   d f e ent c l i a e r ifr   u tv t  c di i   on ton

图 8 不 同 营 养 条 件 下 F 1 nss .i ou 产  g

Mn p酶情 况 
Fi g.8   F.1gn s s i o u  pr ducng o i  M np  
und r di f r nt c tv e e  f e e   ul i at   c di i n on to  

C tv e C di i   Ul i at   On ton

由表 2 图 6 及 ~图 9可 以看 出 , 种 菌在 不 同的  3

营养 条件 下产锰 过 氧化物 酶 量有 一定 的不 同. 黄孢  原 毛平革 菌在低 碳 高氮 的培 养条件 下 Mn P酶活 最 

高 , 5 0 6U/ 而在 其它 2种培养 基 中 , P酶  为 5 .   L, Mn

兰  

活相对较低 , 这也说明碳源和氮源的比例( / 对  C N) Mn P的产生有一定 的影响 , / 越低有利 于锰过  CN
氧化 物 酶的产生 . 变色 栓 菌也 是在 低碳 高氮 的培养  条件 下 Mn P酶活 最高 , 7 1 6U/ 其所 得 结果  为 8 .   L,
同 张连 慧等 对变 色 栓 菌锰 过 氧 化 物 酶研 究 的结果 

薹   善  

2  

4  

6  

8  

l  0

l  2

l  4

l  6

相似 . 而木 质层孔 菌则 在 高碳低 氮 的培养 条件 下产 
Mn P酶 活最 高 , 8 0 2U/  且 3 菌 产 锰 过 氧  为 8 .  I, 种 化 物 酶 均 在 8d左 右达 到 最 高 .   总体 来 说 , 木质 层  孔 菌 产 锰 过 氧 化 物 酶 相 对 比 其 它 2 种 菌 产  Mn P量高.  
2 3 还 原 糖 的 变 化  .

时闻/  d 囵 黄 孢原 毛平 革 菌  一 变色 栓 菌  口 木质 层 孔菌  

图 9 高 碳 低 氮 培 养 条 件 下 3 茵 产 Mn   种 p的 比较 
 c s   hr e  t  c t v e Fg 9 The om parion of t e  M np under he uli at  i   ·

c ond ton of HCLN  ii    

实验 结果 表 明 , 菌 培养 液 中还 原糖 浓 度随着 培养 时 间 的延长 而逐 渐下 降 , 1  3种 约 6d后 趋 于不 变 , 也 与  这 王传 魁 等  研究 的 结果基 本 相符 ( 图 1 所 示 ) 如 0 .  

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第3 期 

董 旭 杰 等 : 白腐 菌 木 质 素 降 解 酶 的 比较  3种

15 3 

3 结

论 

( ) 过 对 P. hy op r m、 vrio r和  1 通 c rssoi u T. es l co

F 1 n ss3种菌 产漆 酶 的研究 , 明 3种菌均 能产 漆  .i ou  g 表

酶. 目前 , 研究 较多 的T. es oo 漆酶量 最高 , v ri l c r产 在本 
实验 的培养 条件 下 能达N 1 6 5U/ F.ig ss 3 .  L, 1 ou 产漆  n 酶量 次之 , P.hy o oim 产 漆 酶量最 低. 而 cr ss ru p   ( )在 产 锰 过 氧化 物 酶 方 面 , 质 层 孔 菌产 锰 过  2 木 氧化物 酶量 最高 , 其最 高产 酶 量可 达到 8 0 2U/ 而  8 .  L,

4   6   8   l  O l  2 l  4 l  6

时问/  d 黄孢原 毛 平 革茁 + 变色栓茁 —I一 木质 层 孔菌   _ ‘

变色栓 菌产 Mn P的量相 对 比黄孢 原 毛平革 菌 高些.  
( )3种菌 对还 原糖 的消耗趋 势基 本相 似 , 3 随着培 

图 1 高碳 低 氮 培 养 条 件 下还 原 糖 浓 度 的变 化  O
Fi 10 Th   h geofgl o ec c nt a i   g.    e c an     uc s   on e r ton durng t   i  he H CLN  ond ton. c ii  

养时 间的延 长还原糖浓 度逐渐 降低 ,  d后基本 耗尽. 1  6  
参考 文献 :  
嚣、 ) 毯基 罄  亚  f

[1 Sivsn4   2   u        4   o miaah n K a d Red     ] r a a  S 0z8 T6M , 2o0   tta    n   d y C A,De n tain o acs nte wht o  aiimyeep a eo ] ; n 6   C, o a B  n mo s t   flcae i h  i rtb s o ct h nrc 。 r o   e d    。   cr sso im K  —F 77 Ap 1E vrn J. i o i1, 9 5 6 (2 :2 4 2 7 hy op ru B M 1 6 , p. n i [1 M c bo. 1 9 , 1 1) 4 7 —4 7 . o r   n g o p t r p u e   [ ] B mp sJA, e  , r h  e 1Oxd t no  essete v o me tl oltn yawht o u g sJ .ce c ,9 5 2 8 1 3 -  2  u u   Ti M W i tD,ta. iai  f ri n n i n na  l a tb    i rtfn u E] Sine 1 8 ,2 : 4 4
13 . 4 6 

[] 李 慧 蓉 . 腐 真 菌 生 物 学 和生 物技 术 [ ] 北 京 : 学工 业 出版 社 ,0 5 3  白 M . 化 20.   a y E fc    at upadl i nTrme s ri lr r o  tb lm, ppE E vr . c bo. 19 ,9 6 :8 5 ok   g   ev c c s J1 o r [ ] B inP 4  r   ,Ro , fet f rf p l n  inno  a t  es oo ab nmeaoi A —l . n i n M i o i1,9 3 5 ( ) 1 5 - 
1 3. 86  

c i iai  f trcn n e z[ ] yeeb   caefo   a t   ri lr J.Ap 1E vrn Mlrbo. 1 9 , 2 o a a ev c p. n i . co i1 ,9 6 6  o [ ] P ti  , ln .Oxd t no nhae ea db no ap rn yl cs rm Trme s es oo [] 5  ar kJ Col s
( 2) 4 6 1 : 5 3— 4 6 . 5 7  a n e  n s lc e   n ymea t ii sd i g g o h o   u e a d mi s d c t r so   h   i   o   e a   u g s Tr me e  r io o     c i te   urn   r wt   fp r   n   s e   ulu e   ft e wh t r td c y f n u   a t s v e ve sc l r [ ] Fr i g M . 6  e t   Cha g s i  e e t d e z

a dp tnil i orlu g sTr h dr ah ri u J.C nJ Mirbo. 1 9 ,8 4 :1 — 3 0 n  oe t   o to fn u  i o em   az n m[] a .. co i1,9 2 3 () 3 7 4 . abc   c a  
n z C, il   M r i e   T e   1 La c s  s e z e s o   e r t s e y gi: h r c e ia to c t l tc p o e t e n   a t p to  n c [] M u o   Gu l n F, a tn z A  , t a . c a e i o n yme   fPl u o u   r n ic a a t rz — i n, a a y i  r p r is,a d p r i i a i n i  7 

a t aino ci t  fmoeua x gna dM  o iat n J. p. n i n M i o i1, 9 76 : 16 1 4 v o lclro y e n  xd —i []Ap 1E vr . c bo. 19 ,3 2 6 —2 7 . o o r   [3 王 宜 磊 . 耳 液体 培养 特 性 及 胞 外 酶 活性 研 究 [] 中 国食 用 菌 ,0 0 1 () 3 — 3 . 8  侧 J. 2 0 ,9 4 :3 5   [] 谢 9  君, 任 路, 李 维, . 等 白腐 菌 液 体 培 养 产 生 木 质 纤 维 素 降 解 酶 的 研究 [] 四川 大 学 学 报 ( j. 自然科 学 版 ) 2 0 ,7 增 ) 1 1 6  ,0 0 3 ( : 6 —1 6 杨 [ O  王 传 魁 , 1] 勇 . 芝 、 射 菌 产 木 质 素 降 解 酶 的 比较 研 究 [] 纤 维 素 科 学 与技 术 , 03 1 ( )2 —3 . 云 脉 j. 2 0 , 12 :6 0  

[ 文编校 : 曼辉] 本 胡  



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